熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜的一種儀器。
其能提供包括激發光譜、發射光譜以及熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數,從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化,從而闡明分子結構與功能之間的關系。
熒光分光光度計的激發波長掃描范圍一般是~,發射波長掃描范圍~??捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
它的來光路有兩套分光系統自,分別的激發和發射光分光系統,光傳播方向是互垂直的.繪制譜圖方法:1.激發波長不變,以發射波長進行掃描;2.發射波長不變,以激發波長進行掃描.要到最佳激發波長和發射波長,都要做這兩種掃描。
熒光分光光度計有什么優缺點
優點:靈敏度高,可以用于掃描液相熒光標記物所發出的熒光光譜,不但可以做一般的定量分析,
而且還可以推斷分子在各種環境下的構象變化,
從而闡明分子結構與功能之間的關系。1、熒光的光強并不高,所以呈線性情況有時不很理想;
2、某些反應熒光持續的時間較短;
3、熒光的發散方向不集中,不像透射光那樣集中,強度高;
4、受某些離子的干擾影響,熒光會湮滅,試驗速度必須要快。
熒光分光光度計與熒光光度計有什么樣的區別
熒光測定需要單色性較高的激發光,通常會在光束進入樣品之前經單色器分光內,保留所感興趣容的激發波長或波段。
較常見的單色器為棱鏡或是光柵,在一些簡易的熒光系統中也可使用濾波片。在該系統中,由激發光源發出的光經激發單色器分光獲得特定波長的激發光,然后射入樣品池,激發熒光物質的熒光發射。
熒光分光光度計與熒光光度計的區別在于兩者之間的分光系統,前者可以采用色散型單色器,可對入射和發射光波長進行選擇,可進行入射/發射波長掃描,多見于大型通用儀器;后者采用濾光片,具有固定的光譜通帶,一般用于專用儀器中。
熒光分光光度計常用的光源是什么
看你分光光度計的波長范圍。以上的用高級白熾燈,有短波的加氘燈。
熒光分光光度計原理及結構?
基本原理
由高壓汞燈或氙燈發出的紫外光和藍紫光經濾光片照射到樣品池中,激發樣品中的熒光物質發出熒光,熒光經過濾過和反射后,被光電倍增管所接受,然后以圖或數字的形式顯示出來。物質熒光的產生是由在通常狀況下處于基態的物質分子吸收激發光后變為激發態,這些處于激發態的分子是不穩定的,在返回基態的過程中將一部分的能量又以光的形式放出,從而產生熒光.
不同物質由于分子結構的不同,其激發態能級的分布具有各自不同的特征,這種特征反映在熒光上表現為各種物質都有其特征熒光激發和發射光譜;,因此可以用熒光激發和發射光譜的不同來定性地進行物質的鑒定。
在溶液中,當熒光物質的濃度較低時,其熒光強度與該物質的濃度通常有良好的正比關系,即IF=KC,利用這種關系可以進行熒光物質的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似,熒光分析通常也采用標準曲線法進行。
基本結構
1.光源:
為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發射出強度較大的連續光譜,且在~范圍內強度幾乎相等,故較常用。
2.激發單色器:
置于光源和樣品室之間的為激發單色器或第一單色器,篩選出特定的激發光譜。
3.發射單色器:
置于樣品室和檢測器之間的為發射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發射光譜。
4.樣品室:
通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角安排;測量固體時,光源與檢測器成銳角安排。
5.檢測器:
一般用光電管或光電倍增管作檢測器。可將光信號放大并轉為電信號。